- May Grünwald Giemsa
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La técnica de May Grünwald Giemsa es un método utilizado para la demostración de la presencia de bacterias u otros microorganismos en sangre. El frotis, una vez seco, se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados. Generalmente, en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados en la tinción de Romanowsky, basado en una combinación de eosina y azul de metileno. Aunque cada laboratorio emplea su receta, los colorantes y los métodos de tinción más empleados son: Giemsa, Wright y May Grünwald Giemsa.
Esta técnica se basa en la acción complementaria de dos colorantes neutros y en la afinidad de los elementos celulares por los colorantes ácidos o básicos. Estos dos colorantes son May Grünwald y Giemsa. Ambos colorantes son solubles en alcohol metílico y son, por lo tanto, inactivos: es el contacto del agua el que les da un poder colorante. Las sales se disocian entonces coloreando ácido (eosina) y básico (azul de metileno).
Contenido
Preparación de la muestra
Se incluyen los tejidos en parafina y son cortados a 6 micras.
Reactivos
- Solución stock de Jenner:
- 1 g de líquido de Jenner.
- 400 cc de alcohol metílico.
- Solución de trabajo de Jenner:
- 25 cc de solución stock de Jenner.
- 25 cc de agua destilada.
- Solución colorante de Giemsa:
- 1 g de Giemsa en polvo.
- 66 cc de glicerina.
- 66 cc de alcohol metílico.
- Mezclar el Giemsa con la glicerina. Meterlo en estufa a 60 °C durante 2 horas. Añadir el alcohol y mezclar bien.
- Solución diferenciadora de resina al 1%.
- 1 g de resina.
- 100 cc de alcohol etílico al 95%.
- Agua destilada (buffer pH 7).
- Solución A:
- 9,47 g de fosfato dibásico sódico.
- 1000 cc de agua destilada.
- Solución B:
- 9,8 g de fosfato monobásico potásico.
- 1000 cc de agua destilada.
- Por cada 100 ml de agua destilada (buffer pH 7), combinar:
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- 49,6 ml de solución A
- 50,4 ml de solución B.
Procedimiento
- Desparafinar e hidratar, hasta el agua destilada.
- Meter en alcohol metílico, 2 cambios de 5 minutos cada uno.
- Poner los portaobjetos en solución de trabajo de Jenner durante 6 minutos.
- Aclarar en la solución de agua destilada (buffer pH 7).
- Poner los portaobjetos en solución de Giemsa 45 minutos.
- Aclarar rápidamente en la solución diferenciadora de resina. Chequear al microscopio.
- Aclarar en agua destilada.
- Deshidratar en alcohol de graduación ascendente.
- Aclarar en xilol y montar.
Resultados
- Núcleo: azul.
- Citoplasma: rosa a rosa oscuro.
- Bacterias: azul palo.
Bibliografía
- ARP, ed. Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP).
Enlaces externos
Categoría:- Tinciones
- Solución stock de Jenner:
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