May Grünwald Giemsa

May Grünwald Giemsa

La técnica de May Grünwald Giemsa es un método utilizado para la demostración de la presencia de bacterias u otros microorganismos en sangre. El frotis, una vez seco, se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados. Generalmente, en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados en la tinción de Romanowsky, basado en una combinación de eosina y azul de metileno. Aunque cada laboratorio emplea su receta, los colorantes y los métodos de tinción más empleados son: Giemsa, Wright y May Grünwald Giemsa.

Esta técnica se basa en la acción complementaria de dos colorantes neutros y en la afinidad de los elementos celulares por los colorantes ácidos o básicos. Estos dos colorantes son May Grünwald y Giemsa. Ambos colorantes son solubles en alcohol metílico y son, por lo tanto, inactivos: es el contacto del agua el que les da un poder colorante. Las sales se disocian entonces coloreando ácido (eosina) y básico (azul de metileno).

Contenido

Preparación de la muestra

Se incluyen los tejidos en parafina y son cortados a 6 micras.

Reactivos

  1. Solución stock de Jenner:
    1. 1 g de líquido de Jenner.
    2. 400 cc de alcohol metílico.
  2. Solución de trabajo de Jenner:
    1. 25 cc de solución stock de Jenner.
    2. 25 cc de agua destilada.
  3. Solución colorante de Giemsa:
    1. 1 g de Giemsa en polvo.
    2. 66 cc de glicerina.
    3. 66 cc de alcohol metílico.
  4. Mezclar el Giemsa con la glicerina. Meterlo en estufa a 60 °C durante 2 horas. Añadir el alcohol y mezclar bien.
  5. Solución diferenciadora de resina al 1%.
    1. 1 g de resina.
    2. 100 cc de alcohol etílico al 95%.
    3. Agua destilada (buffer pH 7).
  6. Solución A:
    1. 9,47 g de fosfato dibásico sódico.
    2. 1000 cc de agua destilada.
  7. Solución B:
    1. 9,8 g de fosfato monobásico potásico.
    2. 1000 cc de agua destilada.
  8. Por cada 100 ml de agua destilada (buffer pH 7), combinar:
  • 49,6 ml de solución A
  • 50,4 ml de solución B.

Procedimiento

  1. Desparafinar e hidratar, hasta el agua destilada.
  2. Meter en alcohol metílico, 2 cambios de 5 minutos cada uno.
  3. Poner los portaobjetos en solución de trabajo de Jenner durante 6 minutos.
  4. Aclarar en la solución de agua destilada (buffer pH 7).
  5. Poner los portaobjetos en solución de Giemsa 45 minutos.
  6. Aclarar rápidamente en la solución diferenciadora de resina. Chequear al microscopio.
  7. Aclarar en agua destilada.
  8. Deshidratar en alcohol de graduación ascendente.
  9. Aclarar en xilol y montar.

Resultados

Bibliografía

  • ARP, ed. Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP). 

Enlaces externos


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