Una prueba hipoosmótica es un test utilizado para estudiar la vitalidad de una muestra de semen, ya que astenozoospermia total (100% espermatozoides tipo D) no implica una necrozoospermia total( 100% células muertas). Se evalúa el estado anatomo-funcional de la membrana plasmática del espermatozoide. La integridad y buen funcionamiento de la membrana plasmática es fundamental para el metabolismo espermático y para todas las etapas involucradas en el proceso de fertilización.

Los espermatozoides, para migrar por el tracto reproductor femenino necesitan una buena movilidad para trasladarse y ésta va a depender a de la integridad que presenta la membrana. Además, un espermatozoide necesita pasar por los procesos de capacitación, hiperactivación y reacción acrosomal para poder fecundar a un ovocito, y tales procesos involucran a la membrana plasmática. De modo que, la determinación del funcionamiento de la membrana plasmática es un parámetro que indica la capacidad fecundante de los espermatozoides.

La prueba consiste en colocar los espermatozoides en una solución hipoosmótica, de forma que los espermatozoides que estén vivos, es decir, con membranas normales van a ser capaces de incorporar agua e hincharse a nivel de la cola.

Existen otras pruebas que también estudian la vitalidad de los espermatozoides, como son la tinción eosina-nigrosina y la fluorescencia y naranja de acridina.