Inmunoprecipitación de cromatina

Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP) (www.cancerepigenetics.com/tecniquescas.htm) La estructura de la cromatina desempeña un papel fundamental en la función del ADN. Regula procesos que se dan sobre la estructura nucleosomal como la transcripción, la replicación y la recombinación. Por lo tanto, determinar la distribución de las modificaciones específicas de las histonas y sus variantes, así como la de otros componentes de la cromatina sobre en secuencias específicas del ADN puede proporcionar información valiosa acerca de cómo funcionan estas proteínas (y sus modificaciones) dentro del contexto de la cromatina. La Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP) es un método bioquímico usado principalmente para determinar la localización en el genoma de histonas modificadas y de otras proteínas in vivo. Esta técnica consiste en el uso de un anticuerpo que reconozca la proteína de interés no solamente en disolución sino también en la cromatina. La ChIP consta básicamente de dos pasos, entrecruzamiento con formaldehído del ADN a las proteínas unidas a éste in vivo en células para que se fijen las interacciones proteína-proteína y las interacciones proteína-ADN seguido de la inmunoprecipitación de los complejos proteína-ADN con anticuerpos específicos a partir de extractos sonicados para fragmentar la cromatina. Las secuencias específicas de ADN inmunoprecipitadas son entonces amplificadas por PCR para determinar si han sido o no enriquecidas en las muestras correspondientes para cada anticuerpo (Kuo y Allis, 1999).

Referencias

Kuo MH, Allis CD. In vivo cross-linking and immunoprecipitation for studying dynamic Protein:DNA associations in a chromatin environment. Methods. 1999 Nov;19(3):425-33.