El Método de digestión de la sialidasa es un método muy similar al de la diastasa en cuanto a fundamento. Consiste en, mediante el uso de una enzima, eliminar el glucógeno del tejido evitando así su tinción.

Fundamento

La sialidasa, también conocida como neuraminidasa, es una enzima que cataliza la hidrólisis de enlaces alfa-2,3, alfa-2,6 y alfa-2,8 (a una velocidad decreciente, respectivamente) de los residuos siálicos terminales de oligosacáridos, glicoproteínas, glicolípidos, ácido colomínico y sustrato sintético. Actúa sobre el glucógeno descomponiéndolo y así eliminándolo del tejido como tal, por lo que no es teñido.

Tejido control y diana

Cualquier tejido que contenga glucógeno (mucopolisacáridos en general).

Para fijar la muestra se suele utilizar el formol 10%, formol-alcohol o líquido de Carnoy. No suele fijarse con líquido de Zenker o de Helly. El líquido de Bouin elimina las sialomucinas de los tejidos, por lo que tampoco se utiliza.

El medio de inclusión preferible es la parafina, y el grosor de corte de 4 a 6 micras.

Reactivos

1. Solución estabilizadora A
   1. 26,2 g acetato de sodio
   2. 8,9 g cloruro de calcio
   3. 200 cc agua destilada
2. Solución estabilizadora B
   1. 26 g acetato de sodio
   2. 0,8 g cloruro de calcio
   3. 200 cc agua destilada
3. Solución de sialidasa para digestión
   1. 1 cc Sialidasa
   2. 0,1

cc Solución estabilizadora A

Procedimiento

1. Desparafinar e hidratar 2 láminas hasta llegar al agua destilada; una lámina será sometida al proceso de digestión, la otra no.
2. Circundar las secciones de tejido en las láminas con un marcador de diamante.
3. Secar las láminas al aire, por lo menos 2 horas (lo ideal sería dejarlo toda la noche).
4. Colocar las láminas sobre varillas de vidrio en una cubeta, que puede ser cubierta para prevenir el secado de la solución de sialidasa con un papel toalla húmedo en el fondo.
5. Cubrir la lámina marcada para digestión con la solución de sialidasa.
6. Cubrir la lámina que no ha sido digerida con solución estabilizadora B.
7. Ambas láminas deben permanecer cubiertas por 3 horas a temperatura ambiente, para así prevenir el secado de la solución para la digestión.
8. Enjuagar con agua destilada.
9. Continuar con el procedimiento de teñido de mucopolisacáridos solicitado. Este teñido puede realizarse, por ejemplo, con Azul Alcián, aunque el hierro coloidal es más sensible como detector de sialomucinas.

Resultados

• El teñido atribuído a las mucinas salivares será eliminado.

Bibliografía

• (1992) ARP (ed.). Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP).
• Sheehan, Dezna; Hrapchak, Barbara (1980). Theory and practice of Histotechnology, 2 Ed. edición, The C.V. Mosby Company.

Enlaces externos

• http://www.histosearch.com/histonet/Oct00A/Re.SialidaseDigestionA.html