Durante la serie Batman: La serie animada, hubo varios personajes ficticios que hicieron mucho más interesante esta serie.

• Bruce Wayne/Batman: El multimillonario playboy Bruce Wayne, dueño de una de las más importantes compañías (Industrias Wayne). Está soltero y codiciado. Perdió a sus padres cuando era pequeño. Batman es lo contrario a Bruce Wayne: es serio, callado y hace su trabajo discretamente. Batman es el héroe de Gotham City.

• Alfred Pennyworth: El mayordomo de la Mansion Wayne. Estuvo con Bruce después de la muerte de sus padres y conoce la identidad secreta de Batman.

• Dick Grayson/Robin: Tras la muerte de sus padres en el circo, Dick Grayson fue adoptado por Bruce Wayne, quien le reveló que era Batman, convirtiéndole en su compañero Robin. Luego de retirarse como Robin se convirtió en Ala Nocturna.

• Barbara Gordon/Batichica: La Hija del Comisionado Gordon, Barbara Gordon, demostró sus grandes habilidades para luchar y llegó a convertirse en Batichica, la nueva compañera de Batman y Robin.

• Comisionado Gordon: El Comisionado de Gotham City James 'Jim' Gordon, ayuda a Batman y es muy inteligente. Siempre lleva una pistola y usa gafas. Es el padre de Barbara Gordon (Batichica).

• Lucius Fox: El Gerente y Director Ejecutivo de las Industrias Wayne, quien está a cargo de todos los problemas y tratos que se hagan en la empresa.

• El Joker: Es la némesis de Batman y la mente criminal que hace temblar a Gotham City. Su mano derecha es la ex Doctora Harleen Quinzel quien luego de conocer al Joker cambió su nombre por el de Harley Quinn.

• Selina Kyle/Catwoman: Selina Kyle es una ladrona que usa un disfraz haciendo honor a su nombre. Adora a los felinos y fue detenida y amenazada muchas veces por Batman para que no siguiera con sus robos pero, como siempre, no cumple esa promesa.

• Cara de Barro: Matt Hagen se obsesionó con las cremas que fabricaban las Empresas de Roland Dagget. Después de que supuestamente lo mataran con una gran cantidad de crema, Hagen se transforma en Cara de Barro, un ser que moldea su cuerpo formado de barro y se transforma en las personas que desea.

• Rupert Thorne: La cabeza de muchas bandas criminales de Gotham City. Es el culpable de muchas delitos, como la creación de Dos Caras, el secuestro de la doctora Leslie Thompkins, entre muchos otros. Su mano derecha se llama Candace.

• Dos Caras/Harvey Dent: Antiguo fiscal de distrito de Gotham City y gran amigo de Bruce Wayne. Dent fue convertido en Dos Caras, debido a un accidente en una planta que le desfiguró la mitad del rostro, al intentar perseguir a Rupert Thorne quien portaba un archivo con el historial psicológico de Dent, y que atentaba con su carrera de fiscal de distrito. Desde ese incidente se convierte en criminal haciéndole la vida imposible a Thorne. Y odiando a Batman por frustrar sus planes.

• Bane (cómic): Rupert Thorne, harto de ser humillado por Batman, contrata a Bane para destruirlo. Bane es un enmascarado que al activar unas mangueras de su espalda, se le aumenta su fuerza de una manera brutal.

• Baby Doll (Batman): La pequeña Mary sufría de una enfermedad que no le permitía envejecer físicamente, así tenía un cuerpo de muñeca. Ella protagonizó un programa en Gotham City hace 20 años con un selecto grupo de actores, los cuales ya habían envejecido. Baby Doll, con la ayuda de sus secuaces, los secuestra y trata de revivir el pasado.

• El Ninja: Kyodai Ken, estudió con Bruce Wayne sobre artes marciales en Japón. Después de que Bruce lo descubriera tratando de robar la espada de su maestro Yoru Sensei y que ése lo expulsara, Kyodai se convirte en El Ninja. Murió durante la explosión de un volcán mientras luchaba contra Batman.

• El Pingüino: Oswald Cobblepot es un hombre con deformidades que lo asemejan a un pingüino y obsesionado con la fortuna y el dinero. Aunque se retiró del crimen, sus secuaces tomaron su lugar. Sus armamento incluye varios paraguas con ametralletas, lanzallamas y otras armas letales.

• El Espantapájaros: Jonathan Crane era un psicólogo que realizaba experimentos relacionados con el miedo. Esto lo llevó a ser expulsado de sus trabajo por usar personas como conejillos de indias. Casi siempre usa como arma un gas que provoca alucinaciones y puede volver loco a todo el que se propone. Includo, ha llegado a tratar de envenenar a Gotham City con este gas.

• Matthew Thorne: Matthew es el Hermano de Rupert Thorne, un famosos criminal en Gotham City. Su trabajo es el de ser el médico del crimen, al curar a delicuentes.

• Nostromos: Nostromos es un brujo e ilusionista, él cual le miente a la gente diciéndole que predice el futuro, cuando él provoca todo y así obtener dinero con esa farsa.