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Evolución dirigida
La evolución dirigida es un planteamiento técnico de la biotecnología que busca la generación y selección de variantes de proteínas de interés industrial. Para ello, emplea un enfoque de obtención artificial de dichas variantes basado en los mecanismos evolutivos de selección los clones de más interés.
Para ello, se efectúa un protocolo que conceptualmente posee tres pasos:
- El fomento de la variabilidad en el ácido nucleico codificante de la proteína de interés mediante mutagénesis o recombinación al azar. Las técnicas usuales son la PCR en condiciones de baja astringencia (es decir, proclive a error) y el Barajado de ADN (en inglés, DNA shuffling).
- Evaluación de las variantes mutantes de mayor interés y posterior selección. Por ejemplo, mediante ensayos bioquímicos de afinidad con un ligando.
- Amplificación de los mutantes de interés. Puesto que la evolución dirigida suele realizarse a gran escala y la generación de variantes a gran escala, es preciso determinar el fundamento molecular de la característica de interés; es decir, clonar y secuenciar el ADN de los mutantes seleccionados.
Referencias
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- Stemmer, W. P. (1994). «Rapid evolution of a protein in vitro by DNA shuffling» Nature. Vol. 370. n.º 6488. pp. 389–391. ISSN 0028-0836. DOI 10.1038/370389a0. PMID 8047147.
- Voigt, C. A.; Kauffman S., and Wang Z. G. (2001). «Rational evolutionary design: the theory of in vitro protein evolution» Advances in Protein Chemistry. Vol. 55. pp. 79–160. ISSN 0065-3233. DOI 10.1016/S0065-3233(01)55003-2.
- Arnold, F. H. (1998). «Design by directed evolution» Accounts of Chemical Research. Vol. 31. n.º 3. pp. 125–131. ISSN 0001-4842. DOI 10.1021/ar960017f.
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